ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析ELISA試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。
一、選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
中洪博元實驗室常用ELISA試劑盒
二、加樣
可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1）標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2)加樣后及時放入孵箱。
3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4)如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5)標本較多時，請分批操作。
三、孵育
可能原因：
1)孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2)孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1)貼封片或加蓋；
2)按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、洗板
ELISA試劑盒可能原因：
1)采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2)采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。
3)反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1)保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2)合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1)顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2)加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：
1)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2)加樣時保持顯色劑不外流；
3)A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
ELISA試劑盒在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
